Untitled
2026 – SOUP: O Metodă Rapidă Pentru Generarea Casetelor Circulare de Expresie Fără Backbone Bacterian
  • La ALA BIOLAB, am dezvoltat și publicat o nouă metodă care permite cercetătorilor să genereze rapid casete circulare de expresie ADN direct din PCR, fără etape de clonare în bacterii.
  • Metoda, numită SOUP (Self-circularized Overhang-based Unrecombined Products), oferă o alternativă simplă și rapidă pentru prototiparea constructelor genetice utilizate în experimente de expresie genică.
  • Descrierea metodei
  • Această tehnică utilizează o combinație de amplificare PCR, digestie cu enzime de tip IIS, ligare în condiții diluate și tratament cu exonucleaza RecBCD pentru a genera constructe circulare de ADN fără backbone bacterian.
  • Spre deosebire de metodele clasice bazate pe plasmide sau minicercuri ADN, metoda SOUP permite obținerea constructelor circulare în mai puțin de 24 de ore, folosind doar enzime standard de laborator.
  • Acest lucru face metoda ideală pentru prototiparea rapidă a vectorilor de expresie în experimente de biologie moleculară.
  • Rezultatele studiului
  • În cadrul studiului, cassettele generate prin metoda SOUP au fost testate în celule HEK293 folosind un sistem reporter GFP.
  • Rezultatele au arătat că:
  • • cassettele SOUP pot susține expresie robustă a proteinelor
  • • un număr mai mare de celule a exprimat GFP comparativ cu plasmidul parental
  • • la momentele târzii (56 ore), productivitatea totală a expresiei a fost semnificativ mai mare decât în cazul plasmidelor clasice
  • Aceste rezultate demonstrează că metoda poate fi utilizată eficient pentru experimente de expresie genică în celule mamifere.
  • Cum funcționează metoda
  • Metoda SOUP include patru pași principali:
  • 1. Amplificarea cassettei de expresie prin PCR
  • 2. Digestia produsului PCR cu enzime de tip IIS pentru generarea capetelor compatibile
  • 3. Auto-circularizarea ADN-ului prin ligare
  • 4. Eliminarea ADN-ului liniar folosind exonucleaza RecBCD
  • Rezultatul final este un amestec de molecule circulare de ADN care pot fi utilizate direct în experimente de transfectare celulară.
  • Publicație
  • Articolul a fost publicat în jurnalul BioTechniques (2026).
SOUP Method – Rapid Backbone-Free Circular DNA Expression Cassettes
Screenshot 2026-03-15 at 7.34.53 AM
Link articol -Cepleanu-Pascu, I. A., Popa, M. A., Cimponeriu, G. D., & Stoica, I. (2026). Self-circularized Overhang-based Unrecombined Products (SOUP): a rapid in vitro method for generating backbone-free expression cassettes. BioTechniques, 78(1–12), 81–92. https://doi.org/10.1080/07366205.2026.2645351